1，了解各种菌群分析的方法学特点并合理运用,对于保证IBS肠道菌群检测的准确性及其临床应用具有重要意义。
2,最早IBS菌群分析的研究就是采用的细菌培养的方法。但是细菌培养有很多局限性,难以采用一种或者几种培养基对不同的菌种进行培养.培养提供的信息可能不完全或者是有偏差。
3,16SrRNA为原核生物的核糖体RNA,该基因在细菌各种属之间既有高度保守的序列又有相互之间存在差异的碱基,同时该基因还具有种类少、丰度高(约占细菌RNA含量的80%)、分子大小适中的优点,因此广泛用作细菌种属鉴定的依据.通过16SrRNA探针杂交发现IBS有
明显的菌群改变,主要菌群为粪肠球菌、柯林氏菌、粪肠杆菌。
4,荧光原位杂交技术(FISH)是根据不同分类级别上已知微生物的种群特异性DNA序列,利用荧光标记的特异寡聚核苷酸片段作为探针,与目标基因组中DNA分子杂交,检测该微生物种群的存在与丰度。采用FISH技术,发现65%的IBS患者肠黏膜菌群浓度大于/ml,其中超过40%的菌群属于直肠优杆菌-球形梭菌属。同时检测到IBS患者粪便双歧杆菌显著减少,约为正常人群一半,象牙海岸梭菌水平降低,而其他菌群无显著变化,IBS亚群之间无明显不同。FISH可提供微生物形态学、数量、空间分布的信息,具有快速、准确、原位等诸多优点。
5，实时荧光定量PCR是在PCR技术上利用不同的荧光检测定量核酸的技术,运用定量PCR检测腹泻患者粪便中的难辨梭状芽孢杆菌[11],其特异性为95.1%,运用定量PCR技术检测肠
道大约种菌群,发现与正常人群相比,腹泻型IBS患者乳杆菌明显减少,而便秘型IBS患者韦荣球菌增加,所有IBS患者球形梭菌和链状双歧杆菌减少。
6，变性梯度凝胶电泳是以总DNA为模板进行PCR扩增后,在双重梯度变性条件下进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,根据不同菌株基因Tm和迁移率差异达到分离的效果。变性梯度凝胶电泳比较IBS患者与正常人群的肠道菌群谱,发现IBS患者类大肠菌群较正常人群明显增多,需氧菌/厌氧菌比值亦明显升高,同时IBS患者肠道菌群较正常对照存在更明显的动态变化,但其中部分IBS患者抗生素的使用也可能造成肠道菌群的不稳定性。
7，基因芯片,通常指DNA芯片,其基本原理是将大量探针固定于支持物上,然后与标记的样
品进行杂交,通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量。基因芯片分别检测到儿童的肠道细菌为～种,成人为～种,其中主要菌属为梭状芽孢杆菌和拟杆菌,两组人群菌群存在显著性差异,与儿童相比,成人梭杆菌多,拟杆菌和蛋白菌少。
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